微波滅菌機(jī)理研究的材料與方法

微波滅菌機(jī)理研究的材料與方法

1微波爐

    QX微波爐，型號(hào)為QX-30HM7，額定微波頻率2450MHz，額定輸入功率30KW，最大輸出功率800W。

2透析袋

    透析袋截留分子量為3500，貨號(hào)MD34．3．5，干燥時(shí)壓平寬度(半周長(zhǎng))24mm，購(gòu)自北京經(jīng)科宏達(dá)生物技術(shù)有限公司。

3供試菌種

    枯草芽胞桿菌黑色變種ATCC9372，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院微生物所微生物菌種保藏中心。

4培養(yǎng)基

液體普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨109，氯化鈉59，牛肉粉159，蒸餾水1000ml。

固體普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨109，氯化鈉59，牛肉粉159，瓊脂209，蒸餾水1000ml。

5試驗(yàn)菌懸液的制備

    營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞制備：250ml的燒杯中盛50ml的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液，接種2ml的枯草芽胞桿菌黑色

變種ATCC9372芽胞懸液，過(guò)夜培養(yǎng)，將過(guò)夜培養(yǎng)物在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心10min，離心后的沉淀用PBS緩沖液洗滌四次，洗滌后的沉淀加PBS緩沖液，使沉淀懸浮，稀釋成所需濃度，倒入滅菌的三角瓶，分裝到7ml離心管中備用。

    芽胞制備：將活化的枯草桿菌接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，用滅菌曲形棒涂勻，然后在37℃條件下培養(yǎng)。5天后室溫培養(yǎng)，在芽胞率達(dá)到90％以上時(shí)用滅菌勺子刮下芽胞。用滅菌脫脂棉過(guò)濾，除去刮下來(lái)的瓊脂。在45。C的搖床中震蕩24小時(shí)，使其斷鏈，將枯草桿菌分散成單個(gè)芽胞。將枯草芽胞桿菌在7000rpm下離心15min，傾去上清液，加入蒸餾水重新懸浮，然后離心，重復(fù)2次。在8012水浴中保溫10min，殺滅繁殖體。然后在7000rpm條件下離心。用蒸餾水將芽胞稀釋成所需濃度，分裝刮7ml離心管中備用a-15"C條件F保存。芽胞每月制備。

    6透析袋的處理

    將透析袋剪成適當(dāng)K度(10em)-在^體積的2％(m／v)碳酸氫鈉和IrrtmoULEDTA(PH=8 0)中將透析袋煮沸IO分鐘，將透析袋州蒸餾水徹底漂洗，將透析袋置ImfnolfL EDTA(PH=80)中煮沸10分鐘，特透析袋冷卻，存放丁4"0，J蝴商保透析袋始終浸沒(méi)在液體中(從此步起片透析袋時(shí)定要戴手彝操作)，在使州自口州燕餾水將透析袋里外加以清洗。